Генетическая Идентификация – Исследование Генетических (Наследственных) Свойств Сопоставляемых Биологических Объектов С Целью Разрешения Вопросов Об Их Тождестве Или Генетическом Родстве
Генетическая экспертиза
В настоящее время наиболее применимым методом при исследовании незначительных количеств биологических материалов с сохранившейся генетической составляющей, является метод использования ПЦР (полимеразной цепной реакции). Суть метода состоит в том, что, используя специальные реагенты и препараты (программируемые термоциклеры) можно получать неограниченное количество копий интересующего ДНК-материала. ПЦР позволяет использовать в качестве стартовой матрицы малое количество исследуемого биологического вещества, причем с высокой степенью деградации (то есть, с нарушенной структурностью). На практике имеются случаи получения высокоточных результатов при работе с пятнами крови и спермы площадью 2-5 кв. мм, 3-5 волосами с сохранившимися волосяными луковицами. Отмечены положительные результаты при исследовании следов крови и спермы, имеющих давность более 2-х лет. В зависимости от представленного материала и поставленных задач, длительность экспертного исследования составляет 1-4 недели.
Занимаясь анализом ДНК, кодирующей миоглобин, учёный обнаружил в геле (то есть в желатиновой матрице, где фрагменты ДНК перемещаются в электрическом поле со скоростью, зависящей от их размера) целое множество минисателлитов. Это выглядело странным, пусть даже большая часть генов и содержит «мусорные» фрагменты ДНК, которые не принимаются во внимание при его считывании РНК, переносчиком генетической информации от ДНК к месту синтеза белков. При ближайшем рассмотрении он осознал, что образцы ДНК разных людей содержат весьма отличные друг от друга минисателлитные последовательности. Джеффрис сразу понял, что это значит. Последовательности ДНК конкретного человека составляют его ДНК-профиль или «генетический паспорт», который можно использовать для безошибочной идентификации личности. Едва генетик опубликовал результаты своего исследования, с ним тут же связались учёные из Министерства внутренних дел Великобритании: в открытии они увидели надёжный способ проверять, говорят ли правду иммигранты, заявляющие, что состоят в близком родстве с гражданином Великобритании [1] .
Актуальные проблемы диагностики и идентификации криминалистически значимых следов биологического происхождения
Отличительными следами насильственных преступлений, остающихся на месте происшествия, теле и одежде участников, на орудиях преступления, являются объекты биологического происхождения: кровь, волосы, сперма, слюна, индивидуальный запах человека, отдельные ткани и органы человека. В связи с этим обнаружение и изучение следов биологического происхождения, знание закономерностей их образования представляется важным для полного, всестороннего, объективного расследования совершенного преступления.
Практический опыт работы экспертом-биологом в УВД Алтайского края (1977—1996 гг.) позволяет нам сделать вывод, что в осмотре места происшествия при расследовании преступлений необходимо обязательное участие специалиста-биолога. Например, в декабре 1995 года гр. Х. заявил в милицию, что у него пропала мать. Был проведен осмотр жилища матери, но видимых следов преступления обнаружено не было. В апреле следующего года осмотр в этой же квартире провел специалист-биолог, который обнаружил замытые следы крови на диване. Кровь принадлежала потерпевшей. В ноябре того же года в г. Барнауле жена заявила о пропаже мужа. При первоначальном осмотре дома, где проживали супруги, следов, похожих на кровь, обнаружено не было. И только в марте следующего года в ходе повторного осмотра с помощью специалиста-биолога в подвале дома на внутренней поверхности половых досок была обнаружена кровь человека и установлено предполагаемое место совершения убийства. Судебно-генетическая экспертиза подтвердила, что кровь принадлежит потерпевшему. В результате жена созналась в совершении преступления.
Генетическая идентификация личности в судебно-медицинской экспертизе (И
Принимая во внимание опосредованность кодовых признаков, во избежание ошибок на различных этапах исследования, обязательным при ДНК-идентификации как при производстве экспертиз, так и при работе с базами данных является сохранение всех первичных материалов, позволяющих, в случае необходимости, провести повторную оценку данных на уровне сигнальной информации. Признаки, изучаемые при ДНК-идентификации, такую возможность предоставляют, и исследование может быть полностью документировано.
Субъекты генетической идентификации. Субъектами в судебной медицине и криминалистике являются эксперты и специалисты. Генетическая идентификация, как и любой другой вид идентификации, может выполняться в рамках экспертизы или исследования. Если она проводится в процессуальной форме, в виде экспертизы, то по ее результатам оформляется «Заключение эксперта», которое имеет значение судебного доказательства и в качестве такового находит отражение в материалах дела. Результаты исследования, не являющегося экспертизой и выполняемого специалистом, не выступающим в роли эксперта, оформляются в виде «Заключения о результатах исследования», «Справки об исследовании», «Мнения специалиста» и т.д., не имеющих силу судебных доказательств. Различия между экспертизой и исследованием лежат в действующем УПК РСФСР и рассмотрены в УПК и иных источниках. Поскольку процессуальная сторона этого вопроса применительно к ДНК-идентификации не имеет особенностей, мы не будем на ней останавливаться подробно. Сделаем же акцент на несколько ином моменте, касающемся непосредственно субъектов генетической идентификации.
ГЕНОТИПОСКОПИЧЕСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА И ЕЁ НАУЧНЫЕ ОСНОВЫ
Типирование генома человека с целью установления отцовства началось в 1986 году Алексом Джефрисом. Этот год в геномной экспертизе считается основополагающим. Техника геномной идентификации по ДНК была определена в 1987 году в судебно-медицинской практике Великобритании, как метод судебно-медицинской экспертизы.
Первыми учёными, сделавшими начальные шаги на пути изучения ДНК, были Уилкинс, Крик и Бернер, ставшие лауреатами Нобелевской премии по физиологии и медицине в 1962 году [43, с. 398], [25, с. 8]. ДНК — молекула, находящаяся в ядрах человеческих клеток в форме 46 отдельных нитей, каждая из которых свернута в клубок, называемый хромосомой (см. рисунок 1).
Биологические и социальные аспекты генетической экспертизы
Казалось бы, что 99,9% — величина значительная, однако реально это означает, что в каждой тысячной экспертизе возможна ошибка, тогда как международные правила допускают возможность ошибки лишь в каждом десятитысячном случае. При отсутствии одного из родителей доказательным для установления отцовства (материнства) считается значение 99,75%. Более низкое значение в случае дуэта обусловлено невозможностью в ряде случаев однозначно определить, какой же аллель ребенок получил от предполагаемого родителя, так как второй родитель неизвестен. Однако использование большего числа маркеров (локусов) позволяет достичь большего уровня доказательности, сравнимого с уровнем доказательности для трио. Бывают ситуации, когда необходимо установить родство в отношении человека, которого уже нет в живых. Генетическая экспертиза может решить и эту задачу, причем несколькими способами. Наиболее простым является анализ ДНК умершего, полученной из биологического материала патолого-анатомического образца. Такими образцами могут быть как парафиновые блоки с фрагментами органов и тканей, изъятые для гистологического исследования, так и сами гистологические образцы, а также хранящиеся в формалине органы. В случае отсутствия патолого-анатомического материала возможно установление отцовства косвенным путем, т.е. проведение анализа без исследования ДНК предполагаемого отца, а использование ДНК бабушки и дедушки. Поскольку предполагаемый отец не мог получить никакой другой генетический материал, кроме того, который есть у его родителей, т.е. бабушки и дедушки ребенка, то у ребенка не должно быть других аллелей, кроме тех, один из которых совпадает с одним из аллелей его матери, а другой присутствует хотя бы у кого-то одного — либо у бабушки, либо у дедушки. В случае, когда противоречий не наблюдается, также рассчитывается вероятность случайного совпадения комплекса признаков (Р), показывающая принципиальную возможность гипотетического существования для данного ребенка пары индивидуумов в качестве бабушки и дедушки, характеризующейся аналогичным сочетанием аллелей.
Аллелем называется возможная последовательность ДНК в одной и той же точке, т.е. применительно к повторам это означает, что у разных людей в одном и том же участке ДНК может встречаться различное количество мономерных единиц. Такой единицей может быть как один повторяющийся несколько раз нуклеотид, так и несколько десятков нуклеотидов, образующих тандемный ряд. Сочетания различных аллелей по нескольким повторам (локусам), лежащим на разных хромосомах, образуют генотип, характеризующий каждого человека. Чем больше маркеров анализируется в совокупности, тем больше вероятность уникальности такого сочетания, особенно, если каждый из маркеров обладает большим спектром возможных признаков (аллелей). В качестве объекта для выделения ДНК можно использовать любой биологический материал. Причем для идентификации достаточно совсем небольшого количества материала.
Молекулярно-генетические исследования на современном этапе развития как источник доказывания
Случайное загрязнение следов преступления другими биологическими веществами называется контаминацией. Это может случиться вследствие прикосновения, чихания или разговора в непосредственной близости от биологического объекта.
Что касается лабораторных ошибок, возможность которых никогда нельзя исключать при проведении анализа, то именно они являются причиной нарастающего скепсиса общественности в отношении ДНК-идентификации. Ошибки могут возникать на каждом из этапов экспертизы — от сбора образцов до вынесения итогового заключения.
Генетическая идентификация личности
Для свойств, изучаемых в рамках генетической идентификации, характерно то, что обусловленные ими идентификационные признаки являются таковыми за счет генетической детерминации; они едины для всех тканей и выделений организма; для их исследования применяются методы генетического анализа.
Для идентификации человека наряду с его внешним строением и функциональными признаками исследуются также субстанциональные свойства, т. е. свойства внутренней структуры, состава. Таковыми являются генетические свойства объектов, изучаемые в рамках генетической идентификации.
ГЕНЕТИКА И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ
3. Идет процесс достройки (элонгации) праймера из внесенных в реакционную смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов при участии ДНК-полимеразы. Используют обычно термостабильную ДНК-полимеразу термофильной бактерии Thermus aquaticus (Taq-полимераза), что позволяет вести полимеризацию при оптимальной температуре 70. 75 °С. При синтезе ДНК праймеры включаются в ее молекулу. Синтез ДНК с помощью полимеразы протекает только между праймерами, и при этом удваивается число копий именно этого участка ДНК. Молекула ДНК, синтезированная при помощи одного праймера, может служить матрицей для синтеза комплементарной ДНК при помощи другого праймера. Длительность этой стадии 1. 2 мин (рис. 50).
1 мкг, праймеры — по 1. 5 мкл, полимераза — 0,5 мкл, дистиллированная вода — до 100 мкл. Для предотвращения испарения на жидкость в пробирке наслаивают минеральное масло. На первом этапе проведения ПЦР денатурируют ДНК, затем в реакционную смесь, содержащую дезоксинуклеозидтрифосфаты, вносят полимеразу и помещают в амплификатор или термоцик-лер (программируемый термостат). Амплификацию проводят в термоциклере по заданной программе, например: 90 «С — 1 мин; 60 °С — 1 мин; 72ºС — 1 мин (5 циклов); 93 °С — 1 мин; 57 °С -1 мин; 92 °С — 1 мин (5 циклов); 93 °С — 1 мин; 55 °С — 1 мин; ,72 °С — 3 мин (25 циклов).
Черные дыры в Российском Законодательстве 2002 4
Результаты исследования локуса HLA-DQА1 в судебно-медицинских экспертизах показали высокую эффективность используемой тест-системы. Выполняемые с ее помощью исследования отличались высокой чувствительностью в отношении судебно-медицинских объектов. При исследовании локуса HLA-DQА1 не актуальна проблема преимущественной амплификации. Большим достоинством тест-системы является стандартность реагентов. Кроме того, в техническом отношении исследование не трудоемко и быстро осуществимо.
Протоколы выделения ДНК имелись в литературе уже на самом раннем этапе разработки ДНК-анализа в судебной медицине [8,13], поэтому работа касалась изучения оптимальных условий применения этих методов. При отработке техники выделения ДНК рассматривали возможности использования минимальных количеств биологического материала, наилучшей его очистки, сокращения сроков исследования.
К вопросу о возможностях методов генной инженерии при исследовании биологических объектов вещественных доказательств
Общеизвестно, что в клетке зародыша образуются 23 пары хромосом, которые будут передаваться во все клетки будущего организма практически без изменений, и, таким образом, ребенок может иметь только тот генетический материал, который есть у его биологических родителей. Обнаружение у ребенка признаков (аллелей), которых невозможно обнаружить у предполагаемого отца, однозначно, с абсолютной точностью, говорит о том, что это неродной его отец. Единственной тонкостью при таком исключении является количество несовпадающих локу-сов. Несмотря на достаточно низкую частоту мутирования, такие случаи описаны, и соответственно несовпадение отцовского (выявленного у предполагаемого отца) и не материнского (выявленного у ребенка и отличного от того, который получен им от матери) аллеля ребенка по одному локусу не может быть однозначно определено как критерий исключения отцовства.
Помимо установления родства генетическая экспертиза широко используется и при других правовых событиях. В частности типирование по У-хромосоме особенно актуально при анализе образцов, полученных при расследовании изнасилований, так как позволяет анализировать только биологический материал, полученный от лиц мужского пола. Анализ смешанных образцов следов, оставленных на месте преступления, помимо технических осооенностеи типирования еще представляет собой и сложную математическую задачу. Выявление в следах образцов ДНК от большого числа лиц не позволяет получать доказательных результатов в отношении фигурантов дела.
Генетическая экспертиза ДНК
Останки костных и мышечных тканей обнаруживают на месте преступления или на месте тайного захоронения неопознанного трупа, на месте пожара. Любое тело, или его остатки, подвергшиеся воздействию внешних факторов, а также гниению и разложению, могут использоваться для проведения экспертизы ДНК.
Генетическая экспертиза ДНК позволяет с высокой точностью определить причастность того или иного человека к совершенному преступлению, выявить родственные связи и установить отцовство. Молекула ДНК любого человека имеет участки, обладающие индивидуальной уникальностью. Такие участки называются вариабельными тандемными повторами (ВТП). Используя современные методики генетической экспертизы можно с высокой вероятностью идентифицировать человека и получить весомые доказательства для судебного решения.
Генетическая экспертиза после биологической
Специфика проведения экспертизы ДНК Следует помнить, что генотипоскопическое исследование ДНК из-за специфики исследуемых объектов, которыми являются молекулы ДНК, не может ответить на некоторые вопросы, связанные:
При других методах исследования результаты экспертизы носят вероятностный характер и основываются на частоте распространенности у людей того или иного набора аллелей в локусах — исследуемых участках ДНК.
Опыт идентификационных ДНК-исследований в случаях массовой гибели людей
Оставшиеся обезличенные трупы исследуются в соответствии с правилами судебно-медицинского исследования неопознанных трупов и захораниваются установленным порядком.
- · составляется календарный план работы подразделения молекулярно-генетических исследований в условиях массового поступления объектов исследования;
- · подготавливаются проекты документов по созданию экспертной аналитической группы, и экспертно-лаборантских бригад для круглосуточной эксплуатации оборудования из расчета его полной загрузки;
- · создается постоянно освежаемый резерв расходных материалов для проведения не менее трех циклов ДНК-типирования при полной загрузке оборудования;
- · обучаются специалисты работе в условиях массового поступления объектов и субъектов экспертизы.
АКТУАЛЬНОСТЬ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ В СУДЕБНО- МЕДИЦИНСКОЙ ПРАКТИКЕ
При анализе выводов об определении гендерной принадлежности биологических объектов нужно учесть то условие, что в редкостных случаях (1:250 000) человек с внешним обликом мужчины не имеет У- хромосомы, т. е. имеет женский генотип. Еще реже (1:40 000) человек с наружным видом женщины имеет мужской генотип. В подобных обстоятельствах ориентировка при розыскных мероприятиях возможно являться ошибочной. Из этого вытекает, что каждое заключение эксперта постоянно надо учитывать в совокупности с прочими доказательствами по делу.
В начале 80-х годов в молекуле ДНК человека были выявлены участки, имеющие структурным полиморфизмом, т. е. у любого человека по своему строению они уникальны. Подобные участки наименованы вариабельными тандемными повторами (ВТП). В 1985 г. генетиком Лестерского университета (Англия) А. Джеффрисом открывший метод генной идентификации личности, в последствии названный ДНК-фингерпринтом (от англ. fingerprint — отпечаток пальца) или генной дактилоскопией (в настоящее время чаще употребляют термин “генотипоскопия”). Но, в различие от отпечатка фаланги пальца в криминалистическом суждении, метод ДНК-фингерпринта разрешает не только идентифицировать личность. Джеффрис направил заинтересованность на свойства ВТП, что разрешило обширнее применять эти участки ДНК в судебной медицине: истинное наследование ВТП от родителей к детям применяется для определения кровного родства; соматическое постоянство (безусловное тождественность ВТП во всех клетках у одного и того же человека) применяется при определении принадлежности частей тела одному или нескольким трупам; присутствие у мужчин и женщин половых Х- и У-хромосом разрешает определить генетический пол биологических объектов; редко ВТП применяется для идентификации личности, т. к. практически невыполнимо повстречать двух человек (кроме монозиготных (однояйцевых) близнецов), обладающими одинаковой структурой молекулы ДНК. Вычислено, что метод разрешает установить данного человека из 100 миллиардов. Обладая данной правильностью метод незамедлительно завоевал несокрушимый успех, вследствие этого стремительно был введен в судебно-медицинскую практику.
Автореферат и диссертация по медицине () на тему: Комплексная разработка вопросов судебно-медицинской генетической идентификации
Субъекты федерального проекта должны быть определены соответствующими государственными программными документами. Целесообразно выделение двух групп участников: 1) выполняющих идентификационные исследования, с дифференцированием функций: массив информации по ичт-°т»м «бъектпч (^»рдям, «трчкянУ-ф^’ир’нщь ча »чгг экспертных учреждений (МВД, Минздрава), а тестирование контингентов — также за счет других ДНК-лабораторий (например, относящихся к РАМН, РАН); 2) осуществляющих правовое, финансовое и иное обеспечение проекта (Минюст, Генпрокуратура, Минфин, и т.д.).
Разработанная концепция включала в себя целый ряд положений, касающихся >боснования целесообразности, принципов и механизмов создания федеральной системы ДНК-эегистрации, с учетом особенностей, существенных для России.
Генетическая Идентификация – Исследование Генетических (Наследственных) Свойств Сопоставляемых Биологических Объектов С Целью Разрешения Вопросов Об Их Тождестве Или Генетическом Родстве
Данное открытие и послужило началом развития ДНК-анализа в судебной медицине. «Отпечатки» ДНК генетически детерминированы, обладают достаточной устойчивостью и индивидуальной специфичностью, идентичны в любой ядросодержащей ткани одного человека и неизменны на протяжении жизни человека. Совпадают они только у однояйцевых близнецов.
Нуклеотиды образуют цепь, остов которой состоит из чередующихся остатков дезоксирибозы и фосфорной кислоты, соединенных фосфодиэфирной связью. Атом в 5-положении одного пентозного кольца соединен через остаток фосфорной кислоты с атомом в 3-положении следующего пентозного кольца. Азотистые основания не участвуют в формировании остова цепи. Нуклеотид на одном конце цепи имеет свободную 5-группу (5-конец), а на другом — 3-группу (3-конец). Последовательность нуклеотидов (азотистых оснований) принято обозначать в направлении от 5-конца к 3-концу. В этой последовательности закодирована генетическая информация, носителем которой является ДНК.
25 Июл 2019 jurist7sib 173
